為什么要做EMSA實(shí)驗(yàn)，EMSA有什么用。

• EMSA（Electronic Mobility Shift Assay) 是測定核酸(RNA/RNA）結(jié)合蛋白與目標(biāo)分子結(jié)合活性的一種傳統(tǒng)技術(shù)。EMSA應(yīng)用最多的是測定與雙鏈DNA特定序列結(jié)合的結(jié)合（查看EMSA工作原理）。 

• 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子參與基因的調(diào)節(jié)與控制，與生物體的生老病死都有關(guān)系。正常細(xì)胞有正常的轉(zhuǎn)錄因子活性，疾病時(shí)就出現(xiàn)異常。差不多每種癌癥細(xì)胞都有異常的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。例如兒童淋巴性白血病大部分都有異常活化的NFkB。頭頸部腫瘤異常活化的STAT3很常見。

• 近年火熱的干細(xì)胞與誘導(dǎo)性干細(xì)胞技術(shù)都涉及到轉(zhuǎn)錄因子的作用：誘導(dǎo)體細(xì)胞向干細(xì)胞轉(zhuǎn)化的幾種基因與基因產(chǎn)物全部都是轉(zhuǎn)錄因子。

• EMSA結(jié)合了電泳技術(shù)，能夠?qū)Πl(fā)生結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行確認(rèn)。相對而言，其它任何沒有結(jié)合電泳分離技術(shù)的測定方法，如基因（核酸）芯片，蛋白芯片，微孔板法轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合測定，ChiP篩選測出的活化轉(zhuǎn)錄因子，都需要用EMSA進(jìn)行確認(rèn)。如右圖所示，EMSA測定中出現(xiàn)了6-7條帶。在EMSA測定中，第1與第3電泳道是STAT5陰性，但在生物芯片點(diǎn)陣或微孔板測定中，都會出現(xiàn)陽性信號。

• EMSA是確認(rèn)核酸結(jié)合蛋白活性的金指標(biāo)，在可預(yù)見的相當(dāng)時(shí)間內(nèi)，EMSA都是對TF活性進(jìn)行確認(rèn)的不可替代的技術(shù)。

• 結(jié)合抗體的Super Shift EMSA是對多聚合體的成分進(jìn)行鑒定。EMSA結(jié)合報(bào)告基因的測定能夠確認(rèn)所涉及到的基因調(diào)節(jié)控制。</5>

• EMSA測定的轉(zhuǎn)錄因子活性是細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路的重要環(huán)節(jié)，任何信號傳導(dǎo)都會與轉(zhuǎn)錄因子激活連接并且啟動轉(zhuǎn)錄過程。信號通路中的分子磷酸化有時(shí)并沒有EMSA可檢測的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，后來用免疫熒光證明核內(nèi)根本沒有NFkB的核轉(zhuǎn)運(yùn)。

• 隨著測定技術(shù)的改進(jìn)，非放射性EMSA能夠比放射性同位素標(biāo)記的方法（要4-5天出結(jié)果）更快出結(jié)果，而且比大多數(shù)信號傳導(dǎo)通路分子的分析方式更快出結(jié)果。利用微奧基因的產(chǎn)品與技術(shù)（查看相關(guān)技術(shù)與產(chǎn)品），EMSA測定最快可以在2-2.5小時(shí)完成（查看），靈敏度也超過用放射性同位素標(biāo)記的方法。